Podle statistik WHO zemřelo za posledních 40 let na AIDS 25 milionů lidí. Škody způsobené touto infekcí jsou obrovské. Ukázalo se, že většina nakažených je v Africe, odkud tato infekce pochází. U HIV se diagnostika onemocnění stává obzvláště relevantní. Je pravda, že dosud neexistují žádné léky na HIV, ale včasná léčba může prodloužit život pacienta a zlepšit jeho kvalitu.
Diagnostika infekce HIV
Infekce HIV se určuje v různých fázích pomocí následujících metod:
- ELISA – enzymatická imunoanalýza.
- Western blot.
- PCR – polymerázová řetězová reakce.
- Rychlé testy.
Metodu PCR vyvinul americký biochemik Kary Mullis, který za ni v roce 1983 obdržel Nobelovu cenu. Dnes je tato metoda v medicíně v diagnostice všech infekcí považována za vedoucí pro svou přesnost a informační obsah. HIV není v tomto ohledu výjimkou.
Podstata analýzy
Každá živá buňka obsahuje RNA a DNA. Tyto nukleové kyseliny jsou schopné sebekopírovat a sebereplikovat. Pro každou infekci jsou fragmenty DNA jedinečné. Vv biologických tekutinách tyto fragmenty nukleových kyselin cirkulují. Jsou zachyceny a rozpoznány speciálním zařízením - reaktorem. To je základ metody. Laborant tyto úlomky počítá. Retrovirus HIV je monitorován na RNA. Dokonce i s jednotlivými kopiemi virových částic je PCR dokáže detekovat a spočítat.
Jako testovací tekutina se nejčastěji používá žilní krev. Speciální složky metody se vážou na virové částice a činí je detekovatelnými, protože nalezené fragmenty se násobí.
V případě HIV lze výsledek přítomnosti viru získat dlouho předtím, než se objeví klinika. Proto má PCR díky své vysoké citlivosti tak vysokou diagnostickou hodnotu. Obrovským plusem PCR je univerzálnost metody. Inkubační doba infekce pro PCR není překážkou.
Náklady na výzkum
Metoda PCR je poměrně drahá. To je jedna z jeho velkých nevýhod. Vyžaduje nejmodernější vybavení a vysoce kvalifikovaného laboratorního asistenta. Vzhledem k výše uvedenému se diagnostika PCR v malých sídlech neprovádí. Můžete se nechat otestovat pouze na specializovaných velkých klinikách.
Náklady na testování DNA HIV na moskevských klinikách začínají od 2 800 rublů, virová zátěž (virová RNA v plazmě) se určuje pomocí PCR – od 8 800 rublů a rezistence HIV na inhibitory proteázy – od 16 500 rublů. Jak vidíte, ceny jsou poměrně vysoké. PCR lze provádět zdarma na veřejných klinikách v rámci politiky MHI. Důležité,že postup lze provést anonymně. V registru dostane pacient číslo, podle kterého se dozví výsledek. V moderních lékařských centrech existují osobní účty klientů, kam budou tyto údaje zadávány.
Výzkumné cíle
V takových případech je předepsána PCR diagnostika pro HIV:
- Detekce infekce u dítěte narozeného nemocné matce nebo přenašeči za účelem stanovení intrauterinní infekce.
- Pokud ELISA poskytla pochybné výsledky (PCR pro HIV pomáhá v tomto případě stanovit konečnou diagnózu).
- K detekci kvantitativního obsahu viru v těle.
- S pozitivním imunoblotem se vzájemně doplňují pomocí PCR.
- Testování dárců.
- Pro včasnou diagnostiku HIV.
- K určení účinnosti a odolnosti vůči ART.
Výhodou této analýzy je, že PCR na HIV lze provést i u dětí mladších jednoho roku.
Výzkum se často neprovádí pro primární diagnózu, ale již v procesu léčby. Primární diagnostikou jsou sérologické studie (určují hladinu protilátek proti HIV). Pokud se falešně pozitivní výsledek opakuje, může to být s nízkou virovou zátěží.
PCR diagnostikuje HIV, pokud proti němu ještě nejsou žádné protilátky. Metoda ELISA v tomto případě nedává odpověď.
A PCR na HIV již bude pozitivní. Ale příznaky tohoto období HIV jsou nespecifické. Pacient je nejprve dlouhodobě a neúspěšně léčen na ARVI u praktického lékaře. Je třeba mít na paměti, že diagnóza HIV je založena pouze naPCR se nedává, je nutné absolvovat další komplexní testy. Metoda PCR je častěji pomocná pro obtížné případy.
Příprava na analýzu
Před provedením PCR na HIV, 2 dny před testem, byste neměli jíst tučná jídla, alkohol. Také je lepší se psychicky a fyzicky nenamáhat. Pokud je pacientovi předepsána imunostimulace, je zastavena 2 týdny před analýzou.
Krev se nejlépe odebírá ráno. Lze vyšetřit i jiné biologické tekutiny těla (spermie, poševní sekret), ale nejlepším materiálem je krev. Sliny, pot, moč a slzy se nepoužívají, protože obsah viru v nich je minimální.
Plusy PCR pro HIV
Výhodou metody je extrémně nízká pravděpodobnost falešně pozitivního výsledku, univerzálnost reakce pro jakékoli biologické tekutiny těla. Analýza má široký rozsah:
- Jeden odběr krve lze použít k detekci různých infekcí.
- Technika je naléhavá, výsledek je hotový hned druhý den.
- Důvěra je mezi 85 a 98 %.
- Přítomnost HIV lze určit 10-14 dní po infekci (v tuto chvíli ještě nejsou žádné protilátky).
- Žádné věkové omezení, lze provést ihned od narození.
Nevýhody metody
Nevýhody PCR jsou následující:
- Náklady na analýzu.
- Vyžaduje sofistikované lékařské vybavení.
- Vyžaduje vysoce kvalifikovaného laboratorního asistenta a lékaře,analýza příjemce.
- Reakce je vysoce citlivá, takže chyba může být 20 %.
- Může vést k falešně pozitivnímu výsledku, pokud má pacient autoimunitní procesy, onkologické onemocnění nebo chronické infekce.
- Zvláštní čistota laboratorních prostor je nutná, protože virus se do analýzy může dostat ze vzduchu. Pak bude výsledek špatný.
Pro laboratoře, které provádějí PCR, byla pro zlepšení kvality diagnostiky vyvinuta speciální přísná opatření podle systému SanPiN pro vnitřní kontrolu. Navíc je nutné dodržovat všechna pravidla práce s touto technikou:
- Povinné přísně dodržovat informace na zkumavkách.
- Před odběrem krve se znovu podívejte a ujistěte se, že je analýza naplánována.
- Sestra musí zkumavky správně označit.
- Laborantka musí správně provádět všechny manipulace s biomateriálem, aby se zabránilo křížové kontaminaci.
- Testovací systém musí mít vynikající kvalitu.
Pouze při splnění všech těchto podmínek může být chyba v odpovědi jen asi 2 % epizod.
Trvání analýzy
Mnoho zajímá, jak dlouho bude PCR pro HIV připravena. Diagnóza netrvá déle než 8 hodin. Pacient může obdržet odpověď hned následující den. Expresní testování se provádí do 2 hodin.
Spolehlivost PCR
Navzdory mnoha výhodám není PCR považována za ideální diagnostickou metodu. V případě potřeby je kontaktovánpotřeba získat screeningové testy na přítomnost HIV v těle.
Kdy se odebírá krev na analýzu?
Jak dlouho trvat PCR na HIV? Spolehlivý výsledek lze získat již při odběru krve 4-4 dny po údajné infekci. Po 2 týdnech bude spolehlivost na HIV 98% a po 5 dnech - 80%. Přítomnost negativního výsledku v PCR na HIV bude spolehlivá, ale pro absolutně přesný výsledek se provádí také ELISA
Analýza ELISA bude účinná pouze v případě, že existují protilátky proti viru, tato doba může trvat 1–3 měsíce až šest měsíců. Protože ELISA poskytuje vyšší pravděpodobnost (98 % -99,9 %), nelze PCR nazvat 100% potvrzujícím testem na přítomnost infekce HIV. Ale na druhou stranu je to jediná technika, při které nemusíte čekat, až se objeví protilátky.
U HIV může PCR poskytnout informace o účinnosti ART, stadiu onemocnění HIV a počtu VN (kvantitativní hodnocení přítomnosti HIV v těle). To vypovídá o závažnosti a rozsahu změny.
Testování PCR na HIV je také nutné, pokud jsou v krvi protilátky, ale jejich přítomnost klinicky neprokazuje spolehlivost infekce HIV.
Jsou testovány nejen na infekci a příležitostný sex. Jiné příležitosti:
- Plánování těhotenství.
- Nadcházející operace.
- Příležitostný sex.
- Některé profese vyžadují tento test pro přijetí do práce (učitelé, lékaři a další zdravotnický personál).
- Vězni.
- Pacienti s TBC.
- Zaměstnanci ministerstva pro mimořádné situace a policie.
- Vrátil ses z dovolené z exotických zemí (pokud se chceš ujistit, že tam není žádná infekce).
- Prostitutky.
- Zahraniční studenti.
- Drogy.
Také určité symptomy u pacienta mohou vynutit test na HIV:
- Náhlé hubnutí.
- Průjem trvající déle než 3 týdny
- Nepřiměřeně vysoká teplota po dlouhou dobu.
- Oteklé lymfatické uzliny.
- Nevysvětlitelná příčina zápalu plic, kandidózy atd.
Dešifrování analýzy je výsadou ošetřujícího lékaře, nikoli laboranta.
PCR nebo ELISA, co je lepší?
Když je kvalitativně i kvantitativně detekována PCR diagnostika RNA viru HIV. Tato analýza jasně identifikuje konkrétní patogen, i když existuje několik zkříženě reagujících patogenů. Biologický materiál lze použít i v sušené formě. Nevýhodou je vysoká citlivost PCR, kdy falešně pozitivní výsledek může být způsoben přítomností i malého množství cizí DNA na přístrojích nebo zkumavce.
Úkolem a možností ELISA je určit přítomnost protilátek proti retroviru. Přestože jeho přesnost je 99 %, není použitelná v raných fázích.
Kvalitativní testování na HIV
Vysoce kvalitní PCR pro HIV určuje přítomnost viru v těle. Výsledky v tomto případě budou vypadat takto: pozitivní, falešně pozitivní, negativní. Tato studie však neposkytne informace o množství retroviru. Taková kvalitativní analýzanevhodné, pokud již byla infekce HIV v těle zjištěna jinými prostředky.
Je nemožné kontrolovat účinnost léčby pomocí vysoce kvalitní PCR.
Kvantifikace HIV
Prováděno pouze lidmi infikovanými HIV, aby bylo možné spočítat počet kopií virové RNA v biologickém produktu.
Účelem takové studie je sledovat probíhající léčbu a identifikovat odolnost viru vůči ní. Antivirová terapie v takových výpočtech není slepě předepsána lékařem, takže bude účinnější. Mnohem častěji se provádí kvantitativní PCR pro infekci HIV. Tato analýza se zobrazí jako kopie/ml krve.
Jaké výsledky lze poskytnout:
- Virová RNA chybí nebo je velmi malá (asi 20 kopií/ml). Žádná jistota diagnózy.
- Od 20 – 10 kopií do 6. stupně/ml – diagnóza je spolehlivá.
- Více než 106 kopií/ml – vysoké VN.
Laboratoře mohou provádět PCR testování na HIV v reálném čase. To znamená pozorování a numerické vyhodnocení akumulace produktů PCR s automatickým záznamem výsledků.
