Hepatitida C je infekce jater způsobená virem Flaviviridae HCV, který se skládá z jedné nebo více molekul RNA. Ke stanovení hepatitidy C u pacienta se zpravidla provádí řada diagnostických opatření. PCR je analýza, která přesně potvrdí diagnózu. Závěr často poskytnou lékaři, když pacient již má první známky onemocnění.
Co je hepatitida C
Poškození jater virovou infekcí přenášenou krví nebo pohlavním stykem se v lékařství nazývá hepatitida C. Původcem je virus nebuněčných infekčních agens z čeledi Flaviviridae obsahující RNA. Infekce může zůstat v těle po dlouhou dobu, aniž by se projevila. Proto je hepatitida C (jako diagnóza) považována za oprávněnou pouze tehdy, když je pomocí krevního testu pomocí PCR RNA RNA detekován mikroorganismus.
Flavivirus se neprodukuje v uměle pěstovaných izolovaných buňkách. V procesu reprodukce vytváří infekční agens imunologicky odlišné modifikace. Tyto faktory brání tělu dávatvhodnou ochrannou reakci a odborníci mají potíže s vývojem účinné vakcíny.
Virus se přenáší parenterálně. Pro infekci se musí dostat v dostatečném množství přímo do krevního řečiště.
Jaké testy se dělají na hepatitidu C
Virové patologie jater se diagnostikují pomocí laboratorních testů. Klinické studie hepatitidy C se provádějí studiem cizích a nebezpečných antigenů nebo proteinových sloučenin (protilátek) v biomateriálu pacienta, zejména v krvi.
- Enzymatická imunoanalýza (ELISA). Metoda je založena na průkazu lgM protilátek v krvi. Imunoglobulin je považován za největší a je to pentamer. Projevuje se primární ochrannou odpovědí lymfocytů na neznámou cizorodou látku.
- Radioimmunoassay (RIA) - kvantitativní stanovení imunoglobulinu lgM pomocí značeného radioaktivního izotopu jódu.
- PCR hepatitidy C - stanovení virové RNA v biomateriálu (krev). Tato analýza spolehlivě potvrdí diagnózu.
Testování IgG není spolehlivé. Jeho přítomnost v krevním séru může indikovat nejen přítomnost flaviviru, ale také jinou minulou infekci, která má stejný patogen.
Co určuje PCR analýzu
Polymerázová řetězová reakce (PCR) je založena na identifikaci oblastí DNA specifických pro určité patogeny ve vzorcích materiálu pro výzkum (epitel, krev). Analýza umožňuje identifikovat patogenní nejmenší organismy (viry) detekcí jejich RNA nebo DNA v biologickém materiálu.
Laboratorní postup pro detekci protilátek Hepatitida C PCR se provádí ve 3 fázích:
- Vyberte. Studovaný biomateriál se čistí od nečistot a DNA se získává v mobilní fázi chromatografické kolony.
- Zesílení. Analýza se provádí v cykléru zařízení-termostat. Ohřívá a ochlazuje zkumavky s určitou cykličností. Pro jednu studii se provede až 35 cyklů. Výsledkem je dostatečný počet fragmentů DNA k detekci, identifikaci a vyhodnocení patogenu.
- Elektroforéza. Výsledné fragmenty se umístí do gelu s různou saturací agarózy a provede se elektroforéza. Výsledný elektroferogram je analyzován na počítači.
Nepoužívá se pouze standardní PCR studie, ale také analýza Real Time PCR. Toto je diagnostika v reálném čase. Metoda umožňuje kvalitativní a kvantitativní analýzu, která umožňuje identifikovat vznik a dynamiku onemocnění a také předepisovat terapii zaměřenou na odstranění příčiny původu patologie. Real-time PCR se také používá ke stanovení čisté kultury infekčních agens (genotypizace).
Jak se provádí test polymerázové řetězové reakce
Pro diagnostiku lze použít jakoukoli lidskou biologickou tekutinu. Biomateriálem pro testování hepatitidy C je obvykle krev.
Odběr vzorků pro diagnostiku se provádí v postupukancelář. K odběru krve použijte jednorázové zkumavky s látkou, která inhibuje srážení krve. Aktivity zaměřené na prevenci šíření infekčních agens pomáhají zabránit vstupu dalšího kmene mikroorganismů zvenčí.
Krev pro PCR hepatitidy C se odebírá ráno nalačno. Vzorek je okamžitě odeslán do laboratoře. Biomateriál je dovoleno skladovat při teplotě +4 až +8 stupňů Celsia. Nádoby jsou označeny a opatřeny pokyny. Výsledky testů jsou k dispozici do 48 hodin, někdy i dříve.
Typy PCR
Rozsah použití polymerázové řetězové reakce je poměrně široký. Infekcionisté určují pomocí PCR hepatitidu B, nemoci přenášené hmyzem sajícím krev, AIDS, tuberkulózu. V onkologii jsou pomocí této metody detekovány nádorové buňky v časném stadiu.
Existuje asi čtrnáct typů analýz. Použití jednoho nebo druhého typu závisí na rozsahu a konečných výsledcích analýz. Některé typy PCR jsou nepostradatelné tam, kde je výsledek potřebný do 20 minut.
K diagnostice hepatitidy C se používají 3 typy polymerázové řetězové reakce:
- Kvalitativní hodnocení může být buď pozitivní, indikující přítomnost infekce v těle, nebo negativní, indikující nepřítomnost flaviviru.
- Real-time PCR (kvantitativní analýza) – určuje kvantitativní RNA patogenu v IU/ml.
- Genotypizace je analýza, která odhaluje typ (genotyp) viru.
Přesná identifikace a určení onemocnění, následujevšechny tři typy studií se používají k předepisování optimální terapie.
Kvalitativní analýza polymerázové řetězové reakce
Analýza je povinná pro každého, kdo má test ELISA, který detekoval protilátky proti HCV. Kvalitativní PCR pro hepatitidu C je standardním testem citlivosti. Metoda je zaměřena pouze na detekci, neprovádí se žádné počítání ani izolace jiných látek.
K detekci protilátek se používají speciální testovací systémy s prahem citlivosti alespoň 50 IU/ml. Pokud jsou zjištěny protilátky, jsou předepsány další objasňující testy. Pokud je výsledek negativní, nebudou se provádět žádné další testy.
V některých případech může být falešně negativní výsledek způsoben nekompetentním laboratorním personálem nebo nekvalitními reagenciemi. Pro pojištění je lepší provést analýzu jinde.
Kvantitativní PCR
Metoda se používá k přímému studiu počtu flavivirů v jednom reakčním cyklu. Pro přesné měření se používají fragmenty DNA používané pro hybridizaci nebo fluorescenčně značené primery. Existuje ekonomická možnost detekce pomocí barviva SYBL Green. Barvivo je zaklíněno do malé rýhy v DNA a po ozáření laserem zmodrá.
Koncentrace je určena přístrojem-zesilovačem v digitálním ekvivalentu. Hodnoty se mohou mezi laboratořemi mírně lišit a měly by se proto porovnat s referenčními hodnotami.
Kvantitativní PCRhepatitida C pomáhá zvolit optimální dávkování léků a určit délku terapie. Četnost studie závisí na stádiu onemocnění, typu genotypu a předepsaném průběhu léčby.
Určení genotypu
Virus hepatitidy C má proměnlivou genetickou výbavu. Četné modifikace znemožňují vytvoření vakcíny a také komplikují terapii. Bylo identifikováno a zaznamenáno celkem 11 genotypů a 100 podtypů. V zemích bývalého SSSR detekuje PCR u osob nakažených hepatitidou C především genotypy 1b a 3.
V přítomnosti kteréhokoli z genotypů může cirhóza nebo rakovina jater dovádět. Proto je tak důležité detekovat virus včas.
Pro některé pacienty jsou některé léky určené k boji proti HCV toxické. Genotypizace vám umožňuje určit typ proteinu a předepsat účinný lék.
Ve výsledcích typizačních testů je číslo s malým latinským písmenem označující genotyp viru. Pokud je HCV detekován, ale není typizován, znamená to, že osoba má genotyp, který není typický pro určitou zeměpisnou oblast.
Výsledky analýzy
Lékař se zabývá dešifrováním výsledků. Pouze údaje z několika studií (spolu s anamnézou a vyšetřením) mohou poskytnout celkový reálný obrázek o anamnéze.
- U zdravého člověka test na kvalitativní reakci v biomateriálu nic nezjistí. Pokud je uvedena hodnota "detekováno", je infekce potvrzena a pacientpotřebuje další diagnózu a následnou léčbu.
- Stanovení počtu infekčních agens umožňuje posoudit virovou zátěž na organismus. Normálně kvantitativní PCR hepatitidy C nedetekuje patogen. Indikátor do 810^5 je považován za nízkou zátěž a při správné terapii zaručuje příznivý výsledek. Vyšší hodnoty vyžadují hloubkové vyšetření a stanovení dlouhodobé terapie, za jejíž pozitivní výsledek nemůže nikdo ručit.
- Pozitivní výsledky genotypizace ukazují, který genotyp je rozpoznán. Negativní výsledek indikuje buď nepřítomnost flaviviru, nebo přítomnost genotypu, který není typický pro tuto oblast.
Co znamená pozitivní test PCR
Jakékoli závažné onemocnění vyžaduje komplexní diagnostiku. Pozitivní PCR hepatitidy C potvrzuje diagnózu, ale předpovědi lze provést pouze po dalších laboratorních a instrumentálních studiích.
Detekce viru neposkytuje úplný obraz o patologii. Je nutné identifikovat jeho typ a povahu, určit, jak působí na játra a další orgány. Včasná detekce HCV má často příznivý terapeutický výsledek.
Negativní PCR s pozitivní ELISA
Při pozorování příznaků charakteristických pro poškození jater je vysoká pravděpodobnost, že infekce již pronikla do těla. Proto byste měli kontaktovat hepatologa nebo specialistu na infekční onemocnění. Během pohovorů specialista shromáždí anamnézu a předepíše potřebné vyšetření.
Pokudvýsledky studií PCR hepatitidy C jsou negativní a enzymatická imunoanalýza je pozitivní, což ukazuje na přítomnost protilátek proti flaviviru v krvi. Většinou se to stane, když se infekce dostane do těla v malém množství, takže si s ní imunitní systém poradil sám. Ale tito lidé jsou stále považováni za infikované a musí být vyšetřeni každých 6 měsíců. Pokud je s takovými výsledky testů osobě odepřeno bezplatné lékařské vyšetření, je pro udržení zdraví lepší provést PCR za poplatek, a pokud jsou výsledky pozitivní, kontaktujte specialistu pro diagnostiku a léčbu.
Výhody a nevýhody metody
Při stanovení diagnózy hepatitidy C má PCR několik výhod:
- Včasná detekce patogenu.
- Přesná definice viru.
- Účinnost diagnostiky.
- Minimální chybovost.
- Vysoká citlivost.
Nevýhody metody:
- Vysoké náklady na analýzu. Test vyžaduje drahé vybavení, činidla a vysoce kvalifikovaný lékařský personál. Vše dohromady tvoří značnou částku.
- Přísné požadavky na přepravu biomateriálu.
Léčba zánětu jater
PCR analýza viru hepatitidy C je považována za zásadní pro diagnózu, ale není definitivní. Aby byla terapie účinná, je zapotřebí řada dalších laboratorních a instrumentálních studií. Po absolvování všechdiagnostická opatření, která lékař předepisuje léčbu:
- Je předepsána dieta 5.
- Alkohol je zcela vyloučen.
- Společné podávání interferonu a ribavirinu po dobu 25 dnů.
- Kurzy hepaprotektorů "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- Ve zvláštních případech se používá diskrétní plazmaferéza.
Léky předepsané hepatologem se používají pravidelně, beze změny dávkování. Délku užívání léků určuje lékař po absolvování kontrolních testů. Po absolvování terapie musíte každých šest měsíců navštívit lékaře.
Diagnostika PCR umožňuje identifikovat původce hepatitidy C v raném stádiu. To přispívá k účinnosti terapie a prevenci přechodu onemocnění do tak nebezpečných forem, jako je cirhóza a hepatocelulární karcinom.
